ABi實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
StepOne Plus快速實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是Applied Biosystems首款采用觸摸屏控制、VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR，支持快速PCR反應(yīng)和四重?zé)晒舛糠治觥１緳谀刻峁┢渑渲眉癘Q/IQ服務(wù)套餐方案。
設(shè)備名稱：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 qPCR儀 real-time PCR system
制 造 商：美國(guó)Thermo Fisher公司 產(chǎn)地：新加坡
品 牌：Applied Biosystems（AB）
型 號(hào)：StepOne（48×0.1mL）
StepOne Plus（96×0.1mL）
技術(shù)詳情：見［技術(shù)規(guī)格］
商品報(bào)價(jià)：見［訂貨指南］
主要功能用途
StepOne Plus系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是Applied Biosystems第一款采用觸摸屏操作控制、引入VeriFlex溫度梯度控制模塊的qPCR平臺(tái)?？蓪?shí)現(xiàn)在同一次實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)置6組不同引物退火溫度以確立最佳擴(kuò)增條件，升溫速度快可支持快速PCR反應(yīng)（StepOne不適用）。采用4組熒光檢測(cè)通道（StepOne為3通道），可實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒舛糠治鰴z測(cè)。
主要應(yīng)用包括：
1、基因表達(dá)分析
動(dòng)植物和微生物在生理病理、環(huán)境及外來脅迫下相關(guān)基因表達(dá)的變化分析以及SiRNA誘導(dǎo)基因沉默和基因敲除后特定基因表達(dá)水平的檢測(cè)。
2、miRNA表達(dá)水平的檢測(cè)
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達(dá)水平變化間的關(guān)聯(lián)，研究miRNA 調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制。
3、基因分型（SNP genotyping，Genotyping）
利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進(jìn)行基因分型，得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等?？蓱?yīng)用于如遺傳病診斷，SNP基因分型，藥物代謝酶DME基因分型，法醫(yī)遺傳學(xué)鑒定等。
4、拷貝數(shù)變異(CNV)
拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致長(zhǎng)度1KB以上的基因片段的缺失（減少）、插入、重復(fù)（增加）、重排、倒 位、DNA 拷貝數(shù)目變化，也稱為拷貝數(shù)多態(tài)性(copy number polymorphisms, CNPs）。是造成物種個(gè)體差異和人類許多疾?。ㄈ绨┌Y、遺傳性疾病、心血管疾?。┑囊环N重要遺傳基礎(chǔ)。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)初始樣品的某個(gè)DNA 片段的拷貝數(shù)進(jìn)行定量，用已知拷貝數(shù)為2的DNA內(nèi)參校正而實(shí)現(xiàn)對(duì)目DNA 片段拷貝數(shù)的確認(rèn)。
5、高分辨率溶解曲線分析（High resolution melt， HRM）
DNA序列長(zhǎng)度、GC 含量及堿基互補(bǔ)性差異影響DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt，HRM) 分析是通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強(qiáng)度的變化，了解PCR 產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況，分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)運(yùn)行程序中引入溶解曲線分析環(huán)節(jié)后，可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型，不受突變堿基位點(diǎn)和種類限制，既可對(duì)未知突變進(jìn)行篩查、掃描，又能對(duì)已知突變進(jìn)行分析，還可用于STR分析。
6、病原體檢測(cè)（Pathogen detection）
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫(yī)學(xué)人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病，以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲害的病原體的檢測(cè)確認(rèn)、感染嚴(yán)重程度的量化評(píng)估。
7、蛋白熱穩(wěn)定性分析（Protein thermal shift）
利用實(shí)時(shí)定量PCR儀來分析熱穩(wěn)定性，進(jìn)行配體-蛋白結(jié)合的高通量篩選，突變或修飾對(duì)蛋白熱穩(wěn)定性的影響
使用蛋白結(jié)合染料（如Protein Thermal Shift 染料），實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)上運(yùn)行實(shí)時(shí)熔解實(shí)驗(yàn)，根據(jù)因蛋白熔解導(dǎo)致熒光圖像差異，分析配體與蛋白的結(jié)合穩(wěn)定性?？捎糜谝愿咄亢Y選配體與蛋白的結(jié)合， 篩選能與蛋白靶點(diǎn)結(jié)合的小分子和片段文庫候選藥物、抗體，鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測(cè)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)用于食品的微生物污染監(jiān)測(cè)、肉食類食品食材來源和組成的檢驗(yàn)、如轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因的檢測(cè)等。
9、耐藥基因檢測(cè)等
性能特點(diǎn)
StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有直觀簡(jiǎn)便的操作界面和的實(shí)驗(yàn)設(shè)置向?qū)?，既可以通過彩色觸摸屏操作，也可與PC聯(lián)機(jī)采用StepOne Software進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)分析處理。精確溫控反應(yīng)模塊及先進(jìn)光學(xué)檢測(cè)單元，支持廣泛的研究和檢測(cè)應(yīng)用。
1、功能強(qiáng)大、操作簡(jiǎn)便的StepOne軟件
PCR實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)向?qū)В龑?dǎo)用戶執(zhí)行實(shí)驗(yàn)的各個(gè)步驟，包括樣本和反應(yīng)設(shè)置、熱循環(huán)和熒光檢測(cè)等。高級(jí)設(shè)置適用于進(jìn)行更復(fù)雜應(yīng)用(如多重反應(yīng))的高級(jí)用戶；
實(shí)時(shí)監(jiān)視擴(kuò)增增長(zhǎng)曲線，即時(shí)查看實(shí)驗(yàn)進(jìn)程；
還可通過一臺(tái)遠(yuǎn)程計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)查看擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，并在運(yùn)行完成時(shí)通過電子郵件提醒通知；
自動(dòng)基線和白動(dòng)閾值功能令數(shù)據(jù)分析得以簡(jiǎn)化；
自動(dòng)單核苷酸多態(tài)性基因分型識(shí)別功能，具有直觀的圖表輸出和量值分配特性；
當(dāng)查看擴(kuò)增曲線或單核苷酸多態(tài)性基因分型圖譜時(shí)，易于識(shí)別樣本反應(yīng)孔；
StepOne軟件支持包括標(biāo)準(zhǔn)曲線絕對(duì)定量、比較Ct(ΔΔCt)相對(duì)定量、等位基因鑒別（SNP Genotyping)、陽性/陰性等多種分析方法；
StepOne Software軟件集成高分辨率熔解曲線(High Resolution Melt/HRM)應(yīng)用模塊。HRM 軟件改進(jìn)聚類算法，提高了靈敏度和準(zhǔn)確性，并能夠?qū)蝹€(gè)板上運(yùn)行的多個(gè)檢測(cè)進(jìn)行單獨(dú)分析。
還可選擇符合MIQE 標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)標(biāo)記語言(RDML)格式輸出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
2、VeriFlex 梯度控溫技術(shù)
StepOne Plus的96孔反應(yīng)模塊采用Veriflex梯度溫控技術(shù)，具有六個(gè)獨(dú)立的溫度區(qū)，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的溫度控制和優(yōu)化。
3、多重實(shí)時(shí)定量分析功能
具有最多可支持4個(gè)靶標(biāo)的多重實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)功能。
主要技術(shù)規(guī)格
Applied Biosystems提供的StepOne系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀分為StepOne Plus、StepOne兩款。二者的樣品反應(yīng)模塊、熒光檢測(cè)通道數(shù)量均存在一定差異。
型號(hào) | StepOne Plus（4熒光通道） | StepOne（3熒光通道） |
樣品通量 | 96孔×0.1 mL | 48孔×0.1 mL |
支持的耗材 | 0.1mL 96孔反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜 0.1 mL96孔反應(yīng)板與光學(xué)平蓋 0.1 mL 8連管與光學(xué)平蓋 0.1 mL單管與光學(xué)平蓋 | 0.1mL 48孔反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜 0.1 mL 48孔反應(yīng)板與光學(xué)平蓋 0.1 mL 8連管與光學(xué)平蓋 0.1 mL單管與光學(xué)平蓋 |
反應(yīng)體積 | 10～30μL | |
熱循環(huán)控溫類型 | Peltier-Based System | |
溫度梯度分區(qū)功能 | 6個(gè)可獨(dú)立控制的溫控區(qū)域 | - |
最大模塊變溫速率 | 6.5℃/秒 | 4.6℃/秒 |
最大樣品變溫速率 | 快速模式2.2℃/秒； 標(biāo)準(zhǔn)模式1.6℃/秒 | |
溫度準(zhǔn)確度 | ±0.25℃ (35℃至95℃范圍時(shí)鐘啟動(dòng)后3分鐘開始測(cè)量) | |
溫度均一性 | ±0.4℃(35℃至95℃范圍時(shí)鐘啟動(dòng)后30秒測(cè)量) | |
PCR完成運(yùn)行時(shí)間 | <30分鐘運(yùn)行 | <40分鐘運(yùn)行 |
光學(xué)檢測(cè)性能 | ||
激發(fā)光源 | OptiFlex Blue LED光源 | LED |
激發(fā)/檢測(cè)波長(zhǎng)范圍 | 450–600 nm/500–640 nm | |
熒光檢測(cè)通道 | 4個(gè)熒光通道 | 3個(gè)熒光通道 |
熒光激發(fā)波長(zhǎng) | 4組激發(fā)濾光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：550±10nm CH4：580±10nm | 3組激發(fā)濾光片 CH1：470±15nm CH2：520±10nm CH3：580±10nm |
熒光檢測(cè)波長(zhǎng) | 4組發(fā)射濾光片 CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預(yù)校準(zhǔn))；SYT09 CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預(yù)校準(zhǔn))；HEX, TET CH3：587±10nm/適用于NED/TAMRA /ABY (預(yù)校準(zhǔn))；Cy3 CH4：623±14nm/適用于JUN/ROX(預(yù)校準(zhǔn))；Texas Red | 4組發(fā)射濾光片 CH1：520±15nm/適用于FAM/SYBR Green(預(yù)校準(zhǔn))；SYT09 CH2：558±12nm/適用于VIC/ JOE (預(yù)校準(zhǔn))；HEX, TET CH3：623±14nm/適用于JUN/ROX(預(yù)校準(zhǔn))；Texas Red |
多重分析能力 | 最多4個(gè)靶點(diǎn) | 最多3個(gè)靶點(diǎn) |
動(dòng)態(tài)范圍 | 9個(gè)數(shù)量級(jí)的線性動(dòng)態(tài)范圍 | |
靈敏度 | TaqMan單一報(bào)告基因分析30μL體系中檢測(cè)1拷貝RNaseP模板 | |
精密度 | 分辯5000至10000個(gè)RNaseP模板拷貝(置信度997％) | |
運(yùn)行時(shí)間 | 快速PCR模式：完成40個(gè)循環(huán)的反應(yīng)＜40分鐘 標(biāo)準(zhǔn)PCR模式：完成40個(gè)循環(huán)的反應(yīng)＜2小時(shí) | |
安裝運(yùn)行條件
StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在海拔2km以下使用
工作環(huán)境溫度：15℃ ~ 30℃（推薦）
工作電源：100-240V/50-60Hz/10A；960 W
相對(duì)濕度范圍：15 ~ 80%R.H.
主機(jī)重量：23.6 kg
外觀尺寸尺寸（W×D×H）：270×500×400 mm
組成配置
Applied Biosystems StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀由定量PCR儀主機(jī)、外置電腦工作站、PCR Starter Kit和隨機(jī)軟件包（StepOne Real-Time PCR System Software、Primer Express Software)等組成。
主機(jī)標(biāo)準(zhǔn)附件包括電源電纜（power Cable）、USB數(shù)據(jù)線（StepOne system Cable）、網(wǎng)線（Ethernet cable）和USB drive（含電子文檔）。
Applied Biosystems 提供了HRM分析軟件和SEA審計(jì)管理軟件可供選擇。
選配USB接口的無線網(wǎng)卡，便于將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)聯(lián)網(wǎng)傳輸。
品名 | 品牌 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 中文描述 | 單價(jià) |
HRM分析功能軟件 | Applied Biosystems | 4486395 | Each | HRM Software Module for QuantStudio 6 and 7 Systems | 詢價(jià) 詢價(jià) |
21CFR Part11審計(jì)管理軟件 | Applied Biosystems | 4486400 | Each | 21CFR Part11 Software Module For QuantStudio 6 and 7 Systems | 詢價(jià) 詢價(jià) |
WiFi網(wǎng)絡(luò)模塊 | Applied Biosystems | A26774 | each | High-Power USB Wi-Fi Module, Maximum speed up to 300 Mbps. Use with SimpliAmp ProFlex, QuantStudio 1/3/5. | 詢價(jià) |
基本耗材
StepOne Plus、StepOne兩款實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀分別配置的是96×0.1 mL、48×0.1 mL的快速反應(yīng)模塊。適用于快速熒光定量PCR管、PCR聯(lián)排管或PCR板。
為使得反應(yīng)管、反應(yīng)板與反應(yīng)模塊的緊密貼合、熱傳導(dǎo)效率均勻一致，建議采用通過Applied Biosystems儀器兼容性測(cè)試的 MicroAmp系列，以確保獲得精確、可重復(fù)的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
品名 | 品牌 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 描述 | 報(bào)價(jià) |
96孔快速熒光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4346907 | 10板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL | 詢價(jià) |
快速熒光定量PCR板 彩色組合裝 | Applied Biosystems | 4483493 | 5板/盒 | MicroAmp EnduraPlate Optical 96-Well Fast Multicolor Reaction Plates with Barcode | 詢價(jià) |
定量PCR 8聯(lián)平蓋 | Applied Biosystems | 4323032 | 300條/盒 | MicroAmp Optical 8-Cap Strips，F(xiàn)lat , Clear | 詢價(jià) |
快速熒光定量PCR單管 | Applied Biosystems | 4358297 | 1000 支/盒 | MicroAmp Fast Reaction Tube with Flat Cap, Clear, 0.1 mL | 詢價(jià) |
定量PCR封板膜 | Applied Biosystems | 4360954 | 25張/盒 | MicroAmp Optical Adhesive Film | 詢價(jià) |
48孔快速熒光定量PCR板 | Applied Biosystems | 4375816 | 20板/盒 | MicroAmp Fast Optical 48-Well Plate | 詢價(jià) |
48孔定量PCR板封膜 | Applied Biosystems | 4375928 | 25張/盒 | MicroAmp 48-Well Optical Adhesive Film | 詢價(jià) |
訂貨指南
Applied Biosystems StepOne Plus系列實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供無電腦工作站、帶臺(tái)式電腦或便攜式電腦工作站三種配置套裝。電腦工作站預(yù)裝有StepOne Software、Primer Express Software應(yīng)用軟件。
序號(hào) | 品名 | 貨號(hào) | 套裝配置描述 | 報(bào)價(jià) |
1-1 | Stepone Plus 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 | 4376600 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-Time PCR System Includes： StepOne Plus qPCR instrument with 96-well Fast VetiFlex Block StepOne Plus Starter Kit | 詢價(jià) 詢價(jià) |
1-2 | StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR 工作套裝 | 4376599 | Applied Biosystems StepOne Plus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell tower computer | 詢價(jià) 詢價(jià) |
1-3 | StepOnePlus實(shí)時(shí)熒光定量PCR 工作套裝 | 4376598 | Applied Biosystems StepOnePlus Real-time PCR Systems Includes： Stepone Plus qPCR System (4376600) Dell laptop computer | 詢價(jià) 詢價(jià) |
2-1 | Stepone實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 | 4376357 | Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System Includes： StepOne qPCR instrument with 48×0.1mL Block StepOne Plus Starter Kit | 詢價(jià) 詢價(jià) |
2-2 | StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR 工作套裝 | 4376374 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell tower computer | 詢價(jià) 詢價(jià) |
2-3 | StepOne實(shí)時(shí)熒光定量PCR 工作套裝 | 4376373 | Applied Biosystems StepOne Real-time PCR Systems Includes： Stepone qPCR System (4376357) Dell laptop computer | 詢價(jià) 詢價(jià) |
對(duì)于有GLP、FDA、CFDA管理合規(guī)要求的實(shí)驗(yàn)，Applied Biosystems為StepOne、StepOne Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀提供了專門的2Q驗(yàn)證服務(wù)套餐。
序號(hào) | 品名 | 貨號(hào) | 套裝配置描述 | 報(bào)價(jià) |
3-1 | StepOne IQ/OQ服務(wù)套餐 | 4413678 | IQ/OQ,SVC StepOne | 詢價(jià) |
3-2 | StepOne Plus IQ/OQ服務(wù)套餐 | 4415138 | IQ/OQ,SVC StepOne Plus | 詢價(jià) |
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